叶绿体DNA的制备

wangsheng0726

叶绿体DNA的制备
【实验目的】
   熟悉植物叶绿体DNA的制备方法。
【实验原理】
    叶绿体是绿色植物特有的进行光合作用的细胞器，内有环状双链的叶绿体DNA，在植物的能量代谢和物质代谢过程中发挥着重要的作用，如叶绿素与类胡萝卜素的合成等。(标本检测，你提供标本，我免费给你做实验，成果归你享有Q往圣科技3452125268)
绿色植物的叶片经过匀浆、过滤、离心获得叶绿体，叶绿体被SDS和蛋白酶K裂解释放DNA，裂解液经氯仿/异戊醇抽提去除蛋白等杂质，溶液中的DNA可被乙醇沉淀。
【器材与试剂】(你提供质粒，我给你免费包装成慢病毒Q往圣科技3452125268)
1．        实验仪器  研钵，冷冻离心机，电泳仪，水平电泳槽，移液器
(基金论文，你提供实验材料，我免费给你做实验，成果归你享有Q往圣科技3452125268 )2. 实验试剂  提取液：50 mmol/L Tris-Cl,pH8.0, 0.4 mol/L蔗糖，10 mmol/L NaCl,5 mmol/L EDTA,2 mmol/L β-巯基乙醇；悬浮液：50 mmol/L Tris-Cl,pH8.0，150 mmol/L NaCl, 1 mmol/L EDTA；裂解液：4% SDS, 1 mg/mL蛋白酶K(用悬浮液配制)；氯仿/异戊醇（24：1，v/v），异丙醇，70%乙醇，琼脂糖，TE缓冲溶液：10 mmol/L Tris-Cl(pH8.0),1 mmol/L EDTA；DNA载样缓冲溶液(（10×），溴化乙锭染色液，TAE缓冲溶液（50×），λDNA/EcoR I, Hind III
3．实验材料  新鲜菠菜叶片
【实验步骤】(Q往圣科技3452125268提供12万种免费质粒加慢病毒包装)
1. 叶绿体的提取  称取新鲜菠菜叶片10 g 放入研钵中，加10 mL 冰冷的提取液和少许石英沙，冰浴研磨成匀浆，再加入10 mL提取液，(Q往圣科技3452125268提供免费基因慢病毒包装)用4层纱布将匀浆过滤于一离心管中，4℃，700×g离心5 min，将上清液转移到另一离心管中，4℃，2 000×g离心10 min，弃上清，沉淀即为叶绿体。
2. 叶绿体DNA的提取  沉淀用5 mL悬浮液重新悬浮，加入等体积的裂解液，混匀，37℃保温2 h，加入10 mL氯仿/异戊醇,颠倒离心管数次，4℃，12 000×g离心10 min，取上清，加入1/10体积的醋酸钠溶液和等体积的异丙醇，混匀，-20℃放置2 h，4℃，12 000×g离心10 min，取沉淀，用70%乙醇润洗后，室温干燥。
3．叶绿体DNA的电泳分析  加入100 μL TE 缓冲溶液溶解沉淀，取9 μL DNA溶液和1μL DNA载样缓冲溶液混合，连同λDNA/EcoR I, Hind III一起进行琼脂糖凝胶电泳分析，观察实验结果。
【注意事项】
叶绿体提取时应控制好离心的转速和离心时间，(Q往圣科技3452125268提供12万种免费质粒)否则可能影响到所提叶绿体的纯度，从而影响最终所提叶绿体DNA的纯度。